牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2. 提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
胎牛血清都有哪些重要的指標(biāo)
一、內(nèi)毒素
內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的特有成分。當(dāng)細(xì)菌死亡自溶或粘附在其它細(xì)胞時(shí),才表現(xiàn)其毒性。內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡,血清中內(nèi)毒素含量越低,對細(xì)胞毒性越小,越利于細(xì)胞的生長和傳代;內(nèi)毒素含量過高,會直接導(dǎo)致細(xì)胞提前老化。國際上規(guī)定,胎牛血清的級別,應(yīng)以內(nèi)毒素水平的高低來確定,其中,特級胎牛血清的內(nèi)毒素應(yīng)<10EU/ml
二、血紅蛋白含量
胎牛血清的顏色會根據(jù)血紅蛋白含量的不同表現(xiàn)出黃色、淡黃色、橘紅色、微紅色等。細(xì)胞培養(yǎng)用血清的標(biāo)準(zhǔn)是血紅蛋白含量不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高;反之,數(shù)值越低。實(shí)際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響。這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。
三、總蛋白含量
胎牛血清的總蛋白含量一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明采血的牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。
四、pH值
根據(jù)藥典,胎牛血清的pH值在7.0-8.0之間,并沒有什么具體依據(jù)把進(jìn)口血清和國產(chǎn)血清用7.5這個(gè)分界線界定。
五、滲透壓
胎牛血清滲透壓的檢測一般采用冰點(diǎn)法,滲透壓摩爾濃度(mOsmol/kg):280-360之間
六、微生物
包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體等。隨著各個(gè)品牌血清生產(chǎn)條件的改善提高,細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制。支原體通過0.1um3次無菌過濾去除。如CellMax胎牛血清,3次0.1um無菌過濾以后,又通過培養(yǎng)法和DNA染色法進(jìn)行支原體檢測,結(jié)果均呈現(xiàn)陰性才會放行銷售。關(guān)于噬菌體主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,又無法過濾,很難徹底清除,但對血清質(zhì)量影響不大,不過對于工業(yè)生產(chǎn)的客戶來說,往往會采用γ照射的胎牛血清來避免噬菌體。
七、免疫球蛋白
免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出采血時(shí)的牛齡情況,新生牛血清容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高;胎牛血清不含IgM,IgG的含量也較低??梢酝ㄟ^血清蛋白電泳SDS檢測。
低IgG的胎牛血清推薦適用于抗體生產(chǎn)及相關(guān)領(lǐng)域。
有下列情況者,對血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選:
1.養(yǎng)干細(xì)胞時(shí),干細(xì)胞對內(nèi)毒素非常敏感,如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時(shí),干細(xì)胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過提早審核該批次《檢測報(bào)告》,以決定是否入圍進(jìn)行試用。
2.養(yǎng)免疫細(xì)胞時(shí),過高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。
3.基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),培養(yǎng)的細(xì)胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑,都會讓后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果“失之毫厘,謬以千里”。在準(zhǔn)備血清和其他試劑時(shí),選擇極低的內(nèi)毒素(最好≤1EU/ml),對實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要;
4.原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細(xì)胞轉(zhuǎn)染,或者肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮等難養(yǎng)細(xì)胞的擴(kuò)增,這些都需要挑選好的血清給細(xì)胞以有力支持。因此,挑選更低的內(nèi)毒素,是保證實(shí)驗(yàn)順利的第一步。
5.實(shí)驗(yàn)室有些細(xì)胞,需要長期培養(yǎng)、長期凍存,或者經(jīng)常復(fù)蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的,血清會經(jīng)?;蜷L時(shí)間作用于細(xì)胞。為保證細(xì)胞的健康,都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清,以避免內(nèi)毒素長久對細(xì)胞的毒性影響。
總之,血清中內(nèi)毒素含量過高,更容易導(dǎo)致細(xì)胞“亞健康”,造成數(shù)據(jù)不準(zhǔn),或細(xì)胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡,導(dǎo)致試驗(yàn)中斷失敗。血清中的內(nèi)毒素越低越好。
全球細(xì)胞培養(yǎng)學(xué)會均依據(jù)內(nèi)毒素對血清的品質(zhì)進(jìn)行分級和命名。
內(nèi)毒素含量越低的血清,級別就越高,以胎牛血清為例:
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時(shí),此血清為特級胎牛血清;
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時(shí),此血清為優(yōu)級胎牛血清;
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時(shí),此血清為標(biāo)準(zhǔn)級胎牛血清;
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