貨號

H129

種屬

人

細胞來源

ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進

生長特性

貼壁  上皮樣

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：DMEM +10%FBS （推薦HAKATA優(yōu)等胎牛血清，貨號:HN-FBS-50）

溫度：37℃     氣相：95%空氣,5% CO2

傳代

1. 用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；

2.待細胞長至80-90%時，需要對其進行傳代，推薦傳代比例為1:3至1:5 ；

3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDA消化液置于37°預熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預熱好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為最佳消化時間，記錄最佳消化時間，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之完全脫落，然后收集細胞懸液，1200rpm離心5min，棄上清，加入完全培養(yǎng)基重懸細胞，進行傳代。

保存

凍存條件：80%完全培養(yǎng)基+10%FBS+10%DMSO

(備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液直接重懸細胞，不能預熱后使用。)

保存條件：液氮存儲

供應限制

僅供研究之用

常見問題及解決方案

1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2.收到細胞后盡快更換為含新鮮培養(yǎng)基

3.細胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時后觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。