貨號(hào)

H180

種屬

人

細(xì)胞來源

從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)

生長(zhǎng)特性

輕度貼壁 上皮樣

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：RPMI-1640 +10% FBS+2mM Glutamax+1mM 丙酮酸鈉+1%雙抗

培養(yǎng)瓶：cellbind細(xì)胞培養(yǎng)瓶（corning,3289）

溫度：37℃     氣相：95%空氣，5%二氧化碳

傳代

1.該細(xì)胞貼壁程度很輕，到貨后大部分細(xì)胞懸浮，培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱，在通常培養(yǎng)單層細(xì)胞的條件下培養(yǎng)24到48小時(shí)。細(xì)胞貼壁后再更換新培養(yǎng)基。如有需要，也可以收集培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞，在300g下離心15min，棄去上清，加入7-10ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，再放到新培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代，該細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，并會(huì)使培養(yǎng)基迅速變酸，一般2到3天換一次液；

2.待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底面積70%-80%，需要對(duì)其進(jìn)行傳代，傳代比例為1:2到1:4；每次傳代后48h內(nèi)不要讓細(xì)胞受到干擾以免影響細(xì)胞貼壁。

3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為最佳消化時(shí)間，記錄最佳消化時(shí)間，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之完全脫落，然后收集細(xì)胞懸液，并反復(fù)吹打使細(xì)胞團(tuán)分散，1200rpm離心3min，棄上清，加入完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代。

保存

凍存條件：90%FBS+10%DMSO

(備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞，不能預(yù)熱后使用。)

保存條件：液氮存儲(chǔ)

供應(yīng)限制

經(jīng)供研究之用

常見問題及解決方案

1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基不能用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)。第一次傳代建議傳代比例為1:2。

3.細(xì)胞漂浮：該細(xì)胞貼壁程度很輕，到貨后大部分細(xì)胞懸浮，培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱，在通常培養(yǎng)單層細(xì)胞的條件下培養(yǎng)24到48小時(shí)。細(xì)胞貼壁后再更換新培養(yǎng)基。如有需要，也可以收集培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞，在300g下離心15min，棄去上清，加入7-10ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，再放到新培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。