人降鈣素原定量分析酶聯(lián)免疫檢測試劑盒

本試劑盒僅供科研使用。用于體外定量檢測人血清、血漿中的降鈣素原濃度。使用前請仔細(xì)閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整。如有產(chǎn)品包裝破損或質(zhì)量投拆，請?jiān)谑盏截浺粋€(gè)月之內(nèi)聯(lián)系我們。

降鈣素原簡介：

降鈣素原（PCT）是由116個(gè)氨基酸組成的激素原，分子量大約為12.7KD。PCT由神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞（包括甲狀腺，肺和胰腺組織的C細(xì)胞）表達(dá)，經(jīng)酵切分解為(未成熟) 降鈣素，羧基端肽和氨基端肽。健康人血中僅含有少量的PCT. 1.2. 細(xì)胞感染后PCT會明顯升高。動物模型試驗(yàn)顯示機(jī)體發(fā)生膿毒血癥時(shí)，多組織均能表達(dá)PCT.3.膿毒血癥患者體內(nèi)的PCT只含有114個(gè)氨基酸，缺少氨基酸末端的Ala-Pro.4. PCT水平升高見于細(xì)胞性膿毒血癥，尤其是重癥膿毒血癥和感染性休克.5.6.7.8.9.10.。PCT可作為膿毒血癥的預(yù)后指標(biāo)8.11.12.13，也是急性重癥胰腺炎及其主要并發(fā)癥的可靠指標(biāo).14.15。對于社區(qū)獲得性呼吸道感染和空調(diào)誘導(dǎo)性肺炎患者，PCT可作為抗生素選擇以及療效的判斷的指標(biāo)。

檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中降鈣素原的濃度。降鈣素原捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)本或參考品時(shí)，其中的降鈣素原會與捕獲抗體結(jié)合，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當(dāng)加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人降鈣素原抗體后，抗人降鈣素原抗體與降鈣素原接合，形成夾心的免疫復(fù)合物，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑，若樣本中存在降鈣素原將會形成免疫復(fù)合物，辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測，讀其450nm處的OD值，降鈣素原濃度與OD₄₅₀值之間呈正比，通過參考品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照未知樣本中OD值，即可算出標(biāo)本中降鈣素原濃度。

人降鈣素原定量分析酶聯(lián)免疫檢測試劑盒組成:

標(biāo)本收集:

1.標(biāo)本的收集請按下列流程進(jìn)行操作；

A.細(xì)胞上清標(biāo)本離心去除懸浮物后即可；

B.血清標(biāo)本應(yīng)是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；

C.血漿標(biāo)本，推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時(shí)檢測，

D.標(biāo)本收集后請分裝，凍存于－20℃，避免反復(fù)凍融。

2.血清標(biāo)本不應(yīng)添加任何防腐劑或抗凝劑；

3.標(biāo)本應(yīng)清澈透明，檢測前樣本中如有懸浮物應(yīng)通過離心去除。

4.請勿使用溶血，高血脂或污染的標(biāo)本檢測，否則結(jié)果將不準(zhǔn)確。

注意事項(xiàng):

1.試劑盒請保存在2～8℃。

2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結(jié)晶，請水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。

3.標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶加樣后，剩余部份請丟棄。

4.底物請勿接觸氧化劑和金屬。

5.加樣時(shí)，請及時(shí)更換槍頭，避免交叉污染。

6.嚴(yán)禁混用不同批號的試劑盒組份。

7.充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕叩擊邊緣以保證混勻。

8.室溫反應(yīng)，請嚴(yán)格控制在25～28℃。

9.洗滌過程是至關(guān)重要的，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。

10.試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測時(shí)建議作雙復(fù)孔。

11.加樣過程中避免氣泡的產(chǎn)生。

樣本的稀釋:

血清或血漿樣本建議從2倍開始稀釋

檢測前準(zhǔn)備工作: 

1.試劑盒自冰箱中取出后應(yīng)置室溫（25～28℃）平衡20分鐘；每次檢測后剩余試劑請及時(shí)于2～8℃保存。

2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。

3. 將檢測抗體用檢測抗體稀釋液按標(biāo)識提前10分鐘配制成工作濃度；

4.如有5X準(zhǔn)品稀釋液，請按所需量用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加4水)。

5.標(biāo)準(zhǔn)品: 按標(biāo)簽復(fù)溶體積加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶使降鈣素原終濃度達(dá)到4000ng/ml，室溫反應(yīng)，請嚴(yán)格控制在25～28℃，靜置10~15分鐘后輕輕混懸（建議抽吸幾次）待徹底溶解，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。（標(biāo)準(zhǔn)曲線取七個(gè)點(diǎn)，最高濃度為4000ng/ml,標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接加入作為0濃度.）下圖為標(biāo)準(zhǔn)品稀釋示意圖。

洗滌方法:

自動洗板機(jī)或人工洗板：每孔洗滌液為300ul，注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍干。

實(shí)驗(yàn)過程需自備的材料：

1.不同規(guī)格的加樣槍及相應(yīng)的槍頭；   

2.酶標(biāo)儀；

3.自動洗板機(jī)；                     

4.去離子水或雙蒸水；

操作步驟:

1.通過計(jì)算并確定一次性實(shí)驗(yàn)所需的板條數(shù)，取出所需板條放置在框架內(nèi)，暫時(shí)用不到板條請放回鋁箔袋密封，保存于4℃。

2.建議設(shè)置本底較正孔，即空白孔,設(shè)置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實(shí)驗(yàn)均需做標(biāo)準(zhǔn)品對照并畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.分別將稀釋好的標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100ul/孔)加入相應(yīng)孔中，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，室溫（25～28℃）孵育120分鐘。    

4.洗板5次，且最后一次置厚吸水紙上拍干。

5.每孔加入HRP抗體結(jié)合物工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，室溫（25～28℃）孵育60分鐘。    

6.洗板5次，且最后一次置厚吸水紙上拍干。

7. 加入顯色劑TMB100ul/孔，避光室溫（25～28℃）孵育20分鐘。

8. 加入終止液50ul/孔,混勻后即刻測量OD₄₅₀值。

結(jié)果判斷:

1.復(fù)孔的值在20%的差異范圍內(nèi)結(jié)果才有效，復(fù)孔的值平均后可作為測量值。

2.每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本的OD值應(yīng)減去本底校正孔的OD值。

3.手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn)。通過標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。

4.若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

典型數(shù)值和參考曲線

人降鈣素原參考標(biāo)準(zhǔn)曲線

注意：本圖僅供參考，應(yīng)以同次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算標(biāo)本含量。

靈敏度，特異性和重復(fù)性:

1.靈敏度：多次重復(fù)結(jié)果表明，最小檢出量為48pg/ml。

2.特異性：與人的katacalcin，Calcitonin , alpha-CGRP,beta-CGRP等沒有交叉反應(yīng)。

3.重復(fù)性：板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%.

參考文獻(xiàn):

1、Lee JY, Hwang SJ, Shim JW, Jung HL, Park MS, Woo HY and Shim JY:Clinical Significance of Serum Procalcitonin on Patients with Community- acquired Lobar Pneumonia. Korean J Lab Med. 2010, 30(4): 406-13

2、Maruna P, Nedělníková and Gürlich R:Physiology and Genetics of Procalcitonin. Physiol. Res. 2000, 49: 57-61

3、Schultz MJ and Determann RM:PCT and sTREM-1: The markers of infection in critically ill patients?Med Sci Monit. 2008, 14(12): 241-247

4、Pecile P, Miorin E, Romanello C, Falleti E, Valent F, Giacommuzzi F and Tenore A: Procalcitonin : A Marker of Severity of Acute Pyelonephritis Among Children. Pediatrics. 2004, 114(2): 249-254

5、Smolkin V, Koren A, Raz R, Colodner R, Sakran W and Halevy R:Procalcitonin as a marker of acute pyelonephritis in infants and children. Pediatr Nephrol. 2002, 17: 409-41